Verkunarháttur þess er að hindra próteinmyndun með því að bindast við 30S ríbósóm undireiningu örvera sem eru næmar fyrir
oxýtetrasýklín, þar með
sem kemur í veg fyrir tengingu ríbósóma og amínóasýl-tRNA. Einnig er talið að oxýtetrasýklín tengist öfugt við 50S ríbósóm og breyti gegndræpi umfrymishimnu viðkvæmra örvera. Oxýtetrasýklín getur einnig hamlað próteinmyndun í frumum í miklum styrk.